探讨测量不确定度在临床生化检验中的应用

摘  要 ： 目的  初 步探 讨 测 量 不 确 定度 在 临床 生化 检 验 中的 应 用 。 方 法  按 照 GUM 和 Q UAM 的要 求 ， 采 用 A， B类 不 确定度 的计算方法 ， 评 定肌酸 激酶( C K ) 的测量不确定度 。结果  以长期重复性 和方法 学偏倚 ( 方 法学偏倚 为参考 方法与 临床 常 规 方 法 间的 偏 倚 ) 为分 量进 行 不 确 定 度 的评 估 ， 长期 重 复性 和 方 法 学偏 倚 均是 构 成不 确 定 度 的 主 要 分 量 。结 论  采 用A， B类 评 定 方 法 ， 以 长期 重 复性 和 方 法 学偏 倚 为分 量 进 行 评 估 可 能 更 能 真 实地 反 映 测 量 结 果 的 不 确 定 度 ， 为 进 一 步 研 究提 供 一 些 思 路 和 线 索 。

关键词 ： 肌酸激 酶 ； 测量 不确 定度 ； 临床 生化检 验

中图分 类号 ： R 4 4 6 ． 1 1 2   文 献标 志码 ： A 文章 编号 ： 1 6 7 1 - 7 4 1 4 ( 2 O 1 2 ) 0 5 一 O 9 2 一 O 3

曾经对测 量结 果正 确度 的表示 用误 差来 描述 ，但误差 只能 表示数 轴上 的一 点 ， 测量不 确定度 是 一  个范 围 ， 测 量 结果 的真 值会 在 不 确定 度 的范 围 内 ，   用测 量不 确定 度 来 描 述更 准 确 。测 量 不确 定 度 是  表征合 理地 赋予 被测 量之 值 的分散性 ， 与测 量结 果  相联 系 的参数 [ 1 ] 。由于其 概念 和评价 方法远 较 “ 误  差” 理 论难 以掌握 ， 另一方 面在 日 常检 测工 作 中 ， 也  很难 应用 不确定 度评 定测 定结 果 ， 因此还未 被 临床  化 学检验 人 员广 泛 应 用 到 实 际工 作 中。近 年来 临  床 实验 室认 可活 动 增 多 ， ISO 1 5 1 8 9的 医学 实 验 室  质 量和能 力 的专用 要求 中 明确要求 必要 且可能 时 ，  实 验室应 确 定 检验 结 果 的不 确定 度 。由于 临 床化  学 检验 活动 是一种 测量 过程 ， 是 否能用测 量不 确定  度 来表 述或 如 何 评定 仍 然 在 争 议 。 曾有学 者 应用  G uM 应用 王 治 国 等[2]学 者 和 澳 大 利 亚 临 床 生物化 学 家协 会 ( A A C B )[3] 所 介 绍 的 测 量 不确 定 度 的方法 对临床 生 化 的 部 分 常 规项 目进 行 评定 [ 4 ] 。王治 国等学者 是 以批 内 、 批 间重 复性 和方 法偏倚 为 分量进 行测 量不 确 定 度 的 评估 。方 法 偏 倚 是 以 国家室 间质评 为靶值 ， 而 国家 室 问质评结果 是全 国所 有医院检测 结 果 的 均 值 ， 并 不 是 参 考 方 法 的 检 测 结  果 。对于批 内、 批 间 重 复 性 ， E U R O L A B文件 中指 出正 常情 况下 实验 室 批 内重 复 性 标 准 差 不适 用 于评定 测量 不确 定 度 。本 文 采 用 N A T A 的方 法 ， 结合 王治 国等学 者 和澳 大 利 亚 临床 生 物 化 学 家协 会( A A c B ) 所介 绍 的测 量 不 确定 度 的 方法 以 长期 重复 性 ( 6 个 月 室 内质控 结 果 ) 和方 法 学 偏 倚 为 分量对 C K 测量不 确定度 进行评 价 ， 探 讨测 量 不确 定度在 临床 检验 中的初 步应 用 。

1 材 料与 方法

1 ． 1 材料

1 ． 1 ． 1   主要 仪器 ： 临 床 实 验 室 ： 日立 7 6 0 0全 自动生化 分 析 仪 ； 参 考 实 验 室 ： 日立 U一 3 3 1 0紫 外 分光光度计 。

1 ． 1 ． 2 试 剂 ： 临床实 验 室 ： C K 测 定 试 剂 由上 海 复星长 征 公 司 提供 ； 参 考 实验 室 ： 试 剂 由美 国 s i g m a公 司提供 。

1 ． 1 ． 3 标 准物 质 ： 临床 实验 室 ： 质控 品 由伯乐公 司提供 ， 本 次 试验 使 用 伯乐 质 控 品 Ⅱ水 平 ； 参 考 实验室 ： E R M 由比利 时标 准 物质研 究所 提供 。

1 ． 2   方 法

1 ． 2 ． 1 测定过 程 ： 临床 实验室 ： 每 天按 照仪器 说 明书保养 仪 器 ， 各 项 状 态 良好 ， 测 定 前 仪 器 预 热 3 Omi n 。室 内质 控 品 的测 量 过 程 严 格 按 照 仪 器 说 明书 操作 。参考 实验 室 ： 严 格 按 照 I F C C原 始 手工 参考 方法 的操作 程序对 标 本进行 检 测 [5] 。

1 ． 2 ． 2 测量不 确定 度 的计 算 方法 。

1 ． 2 ． 2 ． 1   长期 重 复性 ( 6 个 月 ) ： 采 集 6个 月 的室内质控结 果 ， 应 用 E x c e l 软 件 计 算 C K( U ／ L ) 检 测的 均 值 、 标 准 差 和 变 异 系 数 ( c v ％)分 别 为2 4 2 ． 8 8 ， 4 ． 0 1 和 1 ． 6 5 ， 6 个 月 的室 内质 控 结果 的标准差 为长期 重复 性 。

1 ． 2 ． 2 ． 2 方法偏 倚 的 计 算 ： 收 集 3 O份混 合血 清 ，分 别在 临床 实验 室 和 参 考 实 验 室 进 行 C K 检 测 其均 值 ( U ／ L ) 分别 为 9 4 ． 3 9 0   7 ， 1 0 2 ． 1 5 2   9 ， 计 算 两 种方 法 间的偏 倚 。应 用 E x c e l 软件 ， 计 算 平均 偏 差 为7 ． 7 6 2   U ／ L ， 偏 差 的 标 准 差 为 ， 0 ． 4 7 4   6   U ／ L ， 求 出方 法学偏 倚 C V b i a s 为 3 ． 9 1   U ／ L 。

U 为合 成不确 定度 ； S长期 为 长期 的测量 不 精密度 的标 准差 ； h为测量 偏 移 的不确 定度 。

2 结 果  以长期 重复 性和 方法 学偏 倚为 分量 计算C K 测量 不确 定度 的结 果 ， 以长 期 重 复性 和 方 法 学偏倚 为分 量 的 测 量 不 确 定 度 ， 结 果 C K 的 S ， b ， U和扩展 不确定 度分 别为 4 ． O 1 ， 3 ． 9 1 ， 5 ． 6 O 和 1 1 ． 2 。

由此 可知 ， 长期 重复 性 和方法 学 偏倚 均为 不确定 度 的主要 分量[ 6 ] 。

3 讨论 溯 源性是 指通 过一 条具 有 规定 不确 定度的不 间断 的比较链 ， 使测 量结 果或 测 量标准 的值 能够 与规定 的参 考标 准 ( 通 常是 国家 测 量标准 或 国 际测 量标 准) 联 系起来 的特性 。在 临床检 验 实际 工作中 ， 结果 的不 确定 度 可 能 有 很 多 来 源 [7] ， 例 如 病 人的准备 、 生物 变异 、 样 品 的采集 及处 理 、 测定 环境 条件 、 仪器 的不确 定度 、 校 准品 的溯 源性 、 质控 品 的质量 等 ， 是 一个 比较复 杂 的因素 。从 临床 分析 流程 来分 析 ， 在 分析过 程 中 ， 对 于有溯 源性 校 准品 的项 目，由于校准 、 质控 和临床 样 品 的测量 过程 流程是 一 样的 ， 即在分 析过程 中 ， 仪 器 温度 的波 动 、 比色杯 光 径的差异 、 比色波 长的差 异 、 加样 系统 的差异 、 清 洗 系统 的差 异 等都可 以用校 准来 减低 ， 成 为不 是不 确定度 的主要来 源 。但 是 ， 校 准 品 有 系统 的偏 差 ， 这是必 须考 虑 的 ， 进 行 B类 评 定 。另 外 ， 测 定 过 程 中 ，人 员 因 素 、 环 境 因素 、 仪器 因素 等 偶然 存 在 随机 变化 的可 能性 ， 这 同样 给测定 带来 了不 确定 度 。这 种不确 定 度 可 以用 室 内质控来 反 映 ， 进行 A 类 评定 。

澳 大利 亚 临床 化 学 家 协 会 ( A A C B ) 为 了 配合澳 大利 亚 的 国家 实 验 室 综合 认 可 体 系 ( NA T A) 在澳 大利 亚 按 照 I S 0   1 5 1 8 9的要 求 ， 认 可 临 床 实 验室 ， 制定 了“ 定 量 医学检 测 中 的测量 不 确定 度一 实验室应 用指 南 ” 。提 出一个 重要 论点 ， 即 “ 测量 的不 确定度 ” 应 只 限于 分 析测 量 过 程 。导 则 中写 到 “ 分 析前 和分 析 后 的因 素并 不 影 响 检 测程 序 本 身 固有 的不 确定 度 ， 因此 这些 因素 可排 除在测 量不 确定 度 的评 估 外 。 ” 在 另 一 处更 明确写 到 “ 在 本 导 则 中 ， 将 不在 实际 检测 方法 中 的不确 定度组 分 ( 如分析 前 和分析后 的各个 组分 ) 排 除在测 量不确 定度 定义 之 外 。 ”本文 在 评估 时 ， 也只 限于评 估测量 过程 中的不 确定度 。

该 实验 室 从 长 期 ( 6 个 月 ) 室 内质控 数据 处 获得实 验 室 内复 现 性标 准 差 既 方便 又可 靠 。因 为在这一 期 间 内 ， 往 往 使用 多 个批 号 试 剂 、 校 准 品 和质控 品 。对 于评 定偏 移 的不确定 度 ， 对 临 床实 验室 而言 ， 如 何 得 到偏 移 数据 常 是 困难 的 一步 ， 也 是 长期以来 困 惑临 床 实验 室 的问题 。有人 介 绍 可 按 美 国N C C L S的文 件 E P 一 9 进 行 方 法 比较 ， 将 两 法 结 果之差 作 为 偏 移 。2 1世 纪 ， 相 继 公 布 了 I S O   1 7 5 1 1和 I S 0   1 8 1 5 3 文件 ， 对 临 床 实 验 室结 果 如何 溯 源 ，有 了较 明确 的说 明和 论 述 。看来 只有 与 参 考 方 法进 行 比较 ， 才有 可 能求 出偏移 。该实 验室 通过 临 床实验 室与 参考 实验室 间 的 比较 ， 计算 出方 法 间的偏倚 。

综 上所 述 ， 该实验 室通 过 以长期重 复性 和 方法学偏 倚 为分 量对 测量不 确定 度进 行评估 ， 长期 室 内质控 的标 准差 为 4 ． O 1 ， 而 方法学 问 的偏倚 为 3 ． 9 1 ，两者 数值 相差 不 大 ， 两 者均是 构成 测量不 确定 度 的 主要分 量 。以长 期 重 复性 和 方 法学 偏 倚 为分 量 对测量不 确定度 进 行 评 估也 许并 不是 很 完 善 的评 估方法 ， 为进一 步研 究提供 一些 思路 和线索 。