摘要：采用液相色谱一离子阱质谱联用技术检测中药降糖制剂中非法掺入的西药成分．选用MG I I C l 8色谱柱，以甲醇、水和甲酸(三者的体积比为8 0．0：2 0．0：0．1)为流动相，对中药降糖制剂的提取液进行液相色谱一离子阱质谱分析．通过与对照品的色谱和质谱行为比较，对中药降糖制剂一荞芪胶囊中非法掺入的合成降糖药进行定性鉴别和初步定量分析．结果表明：该荞芪胶囊中分别检测到苯乙双胍2．6 m g／粒，格列本脲2．0 m g／粒；液相色谱一离子阱质谱联用技术快速、准确，可作为分析检测中药降糖制剂中非法掺入合成药的有效方法．

    关键词：液相色谱一质谱联用技术；中药降糖制剂；苯乙双胍；格列本脲

    近年来中药制剂的发展比较迅速，但有某些生产厂家为了牟取暴利在纯中药制剂或保健品中非法加入化学合成的处方药物，严重违反了国家相关政策法规，威胁患者的健康．已有检测发现，厂家为了增强疗效，向某些中药降糖制剂或保健品中加入如格列本脲、苯乙双胍等口服合成降糖药[1-4 1．这些处方药成分在有效控制血糖的同时，也具有一定的毒性和不良反应．如格列本脲可造成低血糖症～1，苯乙双胍则

    2 0 0 8年6月林艳萍等：液质联用分析中药降糖制剂中掺入的西药成分可引发乳酸性酸中毒J．为确保临床用药安全，这两种药物及类似的合成降糖药必须在医生的指导下严格控制剂量，合理服用．为此，国家对处方药物的不良反应、药物相互作用和应用范围以及注意事项和使用说明都做出了明确规定．若患者在不知情的情况下持续、大量服用掺有西药成分的所谓纯中药制剂，极易引发危险．

    国家食品药品监督管理局2 0 0 4年批准荞芪胶囊为保健食品．本文中检测的胶囊的说明书中称其主要成分为荞麦、黄芪、山楂、葛根、女贞子、五昧子都属天然植物成分．因此，根据《中华人民共和国药品管理法》第四十八条规定，该胶囊不应该含有任何人工合成的化学药物，更不该添加苯乙双胍和格列本脲等处方药．对荞芪胶囊或其他相关产品中非法掺人处方药物的定性或定量检测[9-1 1]结果已经有过相关报告【】4】．文献[1-4】都从中药制剂中检测出化学合成药格列本脲，其中文献[1 1 x~胶囊中格列本脲的含量进行了初步定量，文献[4]同时检测出苯乙双胍和格列本脲两种成分，但没有进行定量研究．因此，有必要建立灵敏、可靠的分析检测方法对中药降糖制剂中非法掺人的合成药进行定性和定量分析．液相色谱一离子阱质谱联用技术(L C—MS)既可以实现定性分析又能满足定量研究的要求．笔者在参考文献[1 2 1基础上建立了液相色谱一离子阱质谱联用检测法，对中药制剂中是否掺人苯乙双胍和格列本脲可以快速、准确地做出判断，并迅速确定其含量．

1材料与仪器

1．1药品与试剂

    苯乙双胍片(2 5 mg)，南通精华制药有限公司生产，产品批号为0 6 0 6 0 1；格列本脲对照品(纯度9 9．5％)，由天津药物研究院试剂合成室合成；某降血糖“纯中药制剂”荞芪胶囊，由荞麦、黄芪、山楂、葛根、女贞子、五味子等组成，是国家食品药品监督管理局2 0 0 4年批准上市的保健食品，由北京市某医药保健品厂生产，产品批号为2 0 0 7 0 5 1 1；甲醇(色谱纯)，天津市康科德科技有限公司生产；甲酸(分析纯)，天津市博迪化工有限公司生产；水为二次重蒸水．

1_2仪器

    美国T h e r m o F i n n i g a n公司L C Q A D MA X液相色谱一离子阱质谱仪，配有T h e r mo S u r v e y o r四元输液泵、自动进样器、柱温箱以及电喷雾离子源，X c a l i—b u r 2．0数据处理系统

2方法

2．1色谱条件

    色谱柱：MG I I C 1 8柱(1 5 0 m m×4．6 mm，5 m，日本资生堂，北京泰克美科技有限公司代理)，流动相为甲醇与0．1％甲酸水溶液(体积比为8 0：2 0)；流速为0．4 m L／m i n；柱温3 0，进样量为1 0．

2_2质谱条件

    电喷雾离子化源，正离子检测方式，离子源喷射电压为2．5 0 k V，毛细管温度为2 0 0 o C，毛细管电压为3 2 V，鞘气流速为2 5流量单位(a．u．)，辅助气流速为1 0(a．u．)，检测方式为一级、二级全扫描质谱．

2．3对照品溶液配制

     取盐酸苯乙双胍片一片，置具塞玻璃管中，加入1 0 mL纯甲醇，超声2 0 m i n，2 0 0 0 f m i n离心1 0m i n．取上清液以甲醇稀释成含苯乙双胍1 0 0 m g／L的对照品储备液，并按照标准曲线的配置要求，将该储备液逐级稀释成含苯乙双胍1 2．5 g／L、2 5 g／L、5 0 g／L、1 2 5 g／L、2 5 0 g／L、5 0 0 g／L的溶液备用．精密称取格列本脲对照品1 0 m g，置1 0 0 m L容量瓶中，以甲醇溶解并稀释至刻度，配置成含格列本脲1 0 0 m g／L的储备液．按照配置标准曲线的要求，精密吸取储备液适量，以纯甲醇逐级稀释成含格列本脲2 0 g／L、5 0 g／L、1 0 0 g／L、2 0 0 g／L、5 0 0 g／L、1 0 0 0 g／L的溶液备用．

2．4受检溶液的配制

    取受检胶囊一粒，将4 0 0 m g内包中药粉末置具塞玻璃试管中，加入1 0 m L甲醇，超声2 0 r ai n，转速为2 0 0 0 d mi n，离心1 0 r ai n，上清液用甲醇稀释后用于质谱检测．

3结果与讨论

3．1苯乙双胍和格列本脲对照品的色谱及质谱行为在上述液相条件下用正离子扫捕方式对苯乙双胍对照品进行L C—MS分析．其色谱保留时间为2．7 6 m i n；一级全扫描质谱得到准分子离子f M+H]为m／z 2 0 6；对m／z 2 0 6进行二级全扫描质谱分析，得到主要碎片离子有m／z 6 0、m／z 1 2 2，m／z 1 6 4和m／z 1 8 9，并据此推断苯乙双胍的质谱裂解途径，详见图1．在上述液相条件下用正离子扫描方式对格列本脲对照品进行L C—MS分析．其液相保留时间为7．7 6r a i n；一级质谱全扫描得到的准分子离子f M+H]为m／z 4 9 4；对m／z 4 9 4进行二级全扫描质谱分析，得到主要碎片离子m／z 3 6 9，并据此推断格列苯脲的质谱裂解途径，详见图2．

3-2受检溶液的定性分析结果

    在相同的条件下，对受检中药降糖胶囊的甲醇提取液进行L C—MS分析，见图3．通过一级全扫捕质谱检测到苯乙双胍和格列本脲的准分子离子，其质荷比分别为m／z 2 0 6和m／z 4 9 4，没有发现其他常见的二甲双胍、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲等已经上市的人工合成降糖药的准分子离子．受检溶液中m／z 2 0 6与m／z 4 9 4的液相色谱保留时间与苯乙双胍和格列本脲对照品的液相色谱保留时间相同．对两个准分子离子分别做二级全扫描质谱分析，分别得到与对照品完全一致的碎片离子，相应质谱图见图3．

    结合色谱保留时间、准分子离子和多级质谱裂解碎片三方面的信息，经过与对照品的比较。可以证实该中药降糖胶囊中，确实含有非法掺入的合成药苯乙双胍和格列本脲．

3．3受检胶囊中苯乙双胍和格列本脲的含量受检溶液、苯乙双胍对照品和格列本脲对照品在相同的L C．MS条件下分析，以选择性离子检测(m／z 2 0 6和m／z 4 9 4)色谱峰面积作为定量依据，通过外标法定量计算．将酉己好的1 2．5 g／L、2 5 g／L、5 O g／L、1 2 5 g／L、2 5 0 g／L、5 0 0~t g／L的苯乙双胍对照品溶液在确定的L C—MS条件下平行进样5，重复3次．记录m／z 2 0 6的离子选择色谱，以m／z 2 0 6的离子峰面积积分值(Y)对苯乙双胍浓度(x)进行线性回归，得到回归方程=8．5 8 6~1 0 X】+7．8 0 4 x 1 0(n：0．9 9 5 4)．说明苯乙双胍的进样量在0．0 6 2 5—2．5 n g的范围内峰面积积分值与浓度的线性关系良好．将受检胶囊粉末的甲醇提取液稀释1 O倍，在相同的检测条件下进样5，记录m／z 2 0 6的选择性离子色谱图．将其峰面积积分，按照外标法计算浓度．结果，受检荞芪胶囊中苯乙双胍含量为2．6 m g／粒．将配好的2 0~t g F L、5 0~t g F L、1 0 0 g／L、2 0 0 t x g／L、5 0 0 g／L、1 0 0 0~t g／L的格列本脲对照品溶液在确定的L C—MS条件下平行进样1 O，重复3次．记录m／z 4 9 4的离子选择色谱，以m／z 4 9 4的离子峰峰面积积分值(Y 2)对格列本脲浓度(x 2)进行线性回归，得到回归方程Y 2=3．4 5 3 x 1 0 X 2+8．1 3 5 x 1 0(r 2=O．9 9 7 5)．说明格列本脲的进样量在0．2～1 0 n g的范同内，峰面积积分值与浓度的线性关系良好．将受检胶囊粉末的甲醇提取液稀释1 0倍，在相同的检测条件下进样l 0，记录m／z 4 9 4的离子选择色谱图．将其峰面积积分，按照外标法计算浓度．结果受检荞芪胶囊中格列本脲含量为2．0 m g／粒．

4结论

    (1)采用液相色谱一质谱串联技术检测出中药降糖荞芪胶囊粉末的甲醇提取液中含有非法掺入的合成药苯乙双胍和格列本脲．在优化后的色谱条件下，实现了复杂中药提取液中特定成分的准确定性和初步定量．该方法可以快速、准确地鉴定中药降糖制剂中非法掺人的西药成分，对于控制中药降糖制剂的质量，保证临床用药安全具有现实意义．

   (2)对受检胶囊粉末的甲醇提取液进行分析时，将一级全扫描质谱中得到的质荷比与所有常见的西药降糖药的准分子离子峰进行比对，只发现苯乙双胍和格列本脲的准分子离子峰，可以断定该胶囊中不含有其他相关的降糖西药．

    (3)对苯乙双胍和格列本脲进行定性分析的过程中，不仅充分利用了质谱可以多通道同时检测的优势，通过筛选苯乙双胍和格列本脲的质荷比，从复杂的中药基质中筛选出它们各自单一组分的色谱图，将其色谱保留时间与标准品的色谱保留时问相比对；而且，通过二级质谱分析对苯乙双胍和格列本脲的结构进行确证，对比其与标准品的质谱裂解规律，更为准确、可靠地完成了对这两种化合物的定性分析．

    (4)对以酸性和中性两个流动相系统分别测定苯乙双胍和格列本脲的方法进行了改进，借助反相色谱柱，使用了单一流动相系统同时测定这两种化合物，并实现了初步定量分析，检测到该荞芪胶囊中分别含有苯乙双胍2．6 m g／粒，格列本脲2．0 m g／~_．