CD2相关蛋白和肾质在多房囊性肾细胞癌中的表达

【 摘要 】   目的 探讨 C D 2相关 蛋 白( C D 2 A P ) 及 肾质 ( n e p h r i n ) 在成人 多房囊性 肾细胞癌 中的表达及意义。方法 收集多房囊性 肾细胞癌标本 2 8 例 、 肾透 明细胞癌标 本 3 2例和单 纯性 肾囊肿标本1 3 例 ， 采用免疫组化方法检测 C D 2 A P 在 上述组 织 中的表达 。从 上述 3 组 组织蜡 块 中每组各 随机抽取 5 例共 1 5 例 ， 重新切片 ， 用 C D 2 A P和。 肾质 ， 做免疫 组化染 色对 照实验 。结 果  在 多房囊性 肾细 胞癌 的肿瘤 细胞 中 C D 2 A P 表达较 强 ， 尤其 在囊壁 的内层上皮 表达强度 明显 增加 。C D 2 A P在 肾透明 细胞癌 中有 弱表达 ， 在单纯性肾囊肿 中没有表达 。肾质和 C D 2 A P在 3 种组 织的对照实验结果中染色 强度和部位完全一致 。结论 C D 2 A P 在多房囊性 肾细胞癌 中的表达具有 特异性 ， 其 表达 与肾透明细胞癌和单纯性 肾囊肿有显著差异 ， 对于多房囊性 肾细胞癌 的鉴别 诊断有 重要意义 。C D 2 A P和肾质在多房囊性 肾细胞癌 中分布一致 的特点 ， 以及上述两种蛋 白的足细胞 特异性对 于多房囊性 肾细胞癌 的形成原 因具有重要提示 。

【 关键词 】 C D 2 相关蛋 白； 肾肿瘤 ； 腺 癌 ， 透 明细胞 ； 肾， 囊 性

多 房囊性 肾细 胞癌 ( m u h i l o c u l a r   c y s t i c   r e n a l   c e l lc a r c i n o m a ， M C R C C ) 是 一种 完全 由囊 腔 构 成 的肿 瘤 ，囊 腔 间隔 内可有 小灶 状 透 明细 胞 ， 是 肾细胞 癌 的一个少 见亚 类 。M C R C C 中肿瘤 细胞 很少 ， 病理 诊 断较困难 。M C R C C与临床中常见的肾癌囊性变和 肾囊肿有 时难 以 区分 ， 它们 的鉴别 诊 断存在 困难 。C D 2 相 关蛋 白 ( C D 2 一 a s s o c i a t e d   p r o t e i n ， C D 2 A P )是 新 近 发 现 的 一 种 接 头 蛋 白 ， 在 肾 脏 中 与 肾 质( n e p h r i n ) 一起共同表达于足细胞上 ， 是 肾小球足细胞 中 的 一 种 重 要 蛋 白 ， C D 2 A P 和 肾 质 同 是 构 成足 细胞 足 突 问裂 孔 隔膜 的重 要 分 子[1.2]。 有 研 究 表明 C D 2 A P 通 过 其羧 基 端 与 肾质 的羧基 端相 互 作 用 ，共 同维 持裂孔 膜 的完 整 性[3]， 它 们 的异 常 常 可 导 致肾脏疾病 。 国外 文 献 报 道 C D 2 A P 在 不 同 肾脏 肿 瘤中的表达 有差 异 ， 在 多 房 囊 性 肾细胞 癌 中 的表 达 强度 和 部位 与 对 照 组 有 明显 区 别[4].M J。 M C R C C 囊 壁 肿瘤 细胞 为透 明细胞 ， 为此 作者研 究 了 C D 2 A P 和 肾质在 多房囊 性。肾细 胞 癌 、 肾透 明 细 胞 癌 (C C R C C) 及单纯 ． 1 生肾囊肿 ( S R C) 中的表 达 情况 ， 探讨 C D 2 A P 和肾质对 于 鉴 别 M C R C C 的意义 ，及 对 于 M C R C C 形 成的提 示 。

对 象 与 方 法

1 ． 收集北 京 大 学 第一医 院 2 0 0 0 年 1 月 _ 2 0 0 7年 1 2 月 以 来 住 院手 术 患 者 病 理 标 本 共 7 3 例 ， 其 中多房囊性 肾细胞 癌 2 8 例 ， 肾透 明细胞 癌 3 2 例 ， 单 纯性 肾囊肿 1 3 例 ，标 本均 经 4 ％ 甲醛 固定 ， 石 蜡 包 埋 。每例病例 的病理 组 织 切 片均 经 两 位高年 资病理 医 师复查 ， 确保诊 断无 误 。

2 ． 免疫组 化 所 用 C D 2 A P 抗 体 ( 鼠抗 人 单 克 隆抗体 ) 、 肾质 ( 兔抗 人 多 克 隆抗 体 ) 和 免 疫 组 化 A B C显 色系 统 试 剂盒 ， 均 购 自美 国 S a n t a C r u z 公 司 。

3 ． 临床 中多房囊性 肾细 胞 癌 、 肾透 明细 胞 癌及单纯 性 肾囊肿 的鉴 别 存 在一定 困难 ， 因此 我们 设 计了上 述 3 组 病例 的对 照 试 验 。 免 疫组 化学 染 色采 用A B C 法 ， 用 P B S 代 替一抗 作 为 阴 性 对 照 ， 操 作 步 骤按 照 试 剂 盒 说 明 进 行 ， 简 述 如 下 ： 石 蜡 组 织 标 本4Ix m 切 片 ，脱蜡 至 水 化 ； 微 波 抗 原 修 复 3 m i n； 自然 冷却 2 0 m i n， 磷 酸 盐 缓 冲溶 液 (P B S ) 冲洗 ， 加 入3 ％ 的过 氧化 氢 ， 反 应 1 0 m i n 以 阻 断 内源 性 过 氧化氢酶 ；P B S 冲洗 ，滴 加非 免疫 动物 血 清 ，孵 育 1 h 后 ；滴加一抗 ( 抗 C D 2 A P 或 抗 肾 质 抗 体 ) ，4 ℃ 过 夜 ；P B S 冲 洗 ， 加 人 生 物 素 标 记 的 二 抗 ， 反 应 4 5 r a i n；P B S 冲洗 ， 滴 加 抗 生 物 素抗 体 反 应 3 0 m i n；P B S 冲洗 ，D A B 显 色 2 m i n 终 止 。 苏木 素复染 ，脱水 ，透 明 。

4 ． 结果 判 断 ：C D 2 A P 和 肾质 表达 于 细胞 质 内 ，依据 细胞 质 内出现 棕 黄 色 颗 粒 为 阳 性 ， 阳性 细胞 数< 1 0 ％ 为 (一) ；1 0 ％～2 5 ％ 为 (+) ；2 6 ％～5 0 ％ 为(+ + ) ；> 5 0 ％ 为 ( + + +) 。

5 ． 统 计 学 处 理 ：采 用 S P S S 1 1 ． 5 软件 包 进 行 统计分析 。 计 数 和 等级 资料用 例数 、 百 分数进 行描述 ，等级 资 料 的 组 问 比 较 采 用 K r u s k a l—W a l l i s 法 。 P <0 ． 0 5 为差 异 有 统计 学意义 。

结 果

1 ． 多房 囊性 肾 细 胞 癌 、 肾 透 明 细 胞 癌 、 单 纯 性肾囊肿 病理 结果 比较见 图 1。

2 ． C D 2 A P 在 多 房 囊 性 肾 细 胞 癌 、 肾 透 明 细 胞癌 、 单纯 性 肾囊肿 中的表达 ( 图 2 ) 。 由 图 2 可 见 ，在多 房囊性 肾细胞 癌 的囊 壁 肿 瘤 细 胞 中 ， 胞 质 内有 较多 棕黄色 的颗 粒 呈 网格 状 ，染 色呈 强 阳性 ，尤 其在 靠近 囊 腔 侧 的细胞 质 中有 明显 的 强 染 ， 围绕 在 囊 壁 内侧 的强 染 部分呈 明显 的线样勾 勒 出囊腔 的轮 廓 。 而肿 瘤 细胞 周 围的 间质 细胞 没 有着 色 。 在 肾透 明细胞癌 中 ，大部分肿瘤 细胞 胞质 内有少 量 棕色颗 粒 ，呈 网格样 ， 表现 为弱 阳 性 ， 且 周 围 的 间质 细 胞 没 有 着 色 ，在单纯 性 肾囊肿 的 组 织 中未 见 到 黄 染 的 细 胞 ， 表 现为 阴性 。 通 过 统 计 学 处 理 实验结 果 表 明 3 种 组 织 的染 色强 度 不 同 (P < 0 ． 0 1) ， 多 房 囊 性 肾细 胞 癌 表 达强 于 肾透 明细 胞 癌 ( P < 0 ． 0 5 ) ， 多 房 囊 性 肾细 胞 癌表 达 强 于 单 纯 性 肾囊肿 ( P < 0 ． 0 5) ， 肾透 明细胞 癌表 达 强 于 单 纯 性 肾囊 肿 ( P < 0 ． 0 5 ) ，3 组 间 比较差 异有统计学意义。

3 ． 在 3 组 组 织 蜡 块 中每组 各 随 机 抽 取 5 例 共1 5 例 ， 重 新 切 片 ， 用 C D 2 A P 和 肾质 ， 做 免 疫 组 化 染色对 照 实验 ， 结果 发 现 肾质 在 上 述 组 织 中表 达 的部位 和 程 度 与 C D 2 A P 的情 况 非 常一致 ( 图 3) 。 如 图所 见 ， 肾质染 色在 多房囊性。肾细胞 癌 中 ，肿 瘤 细胞 胞质 内有 较 多棕黄色 的颗粒呈 网格 状 ，染色呈 强 阳性 ，靠近 囊 腔侧 的细胞 质 中也 出现 明显 的强 染 ， 周 围 的间质 细胞 没 有 着 色 。 在 肾透 明细 胞 癌 中 ， 大部 分 肿瘤 细胞胞 质 内有少 量 棕色颗粒 ，呈 网格 样 ，表现 为弱阳性 ，周 围的 间质 细胞 没 有着 色 ，在单纯 性 肾囊肿 的组 织 中未 见 到 黄染 的细 胞 ， 表 现 为 阴性 。

讨  论

多房囊 性 肾细胞癌是 肾细胞癌 中的一 个少见 的亚类， 占肾癌 的 2 ． 3 ％ ～ 3 ． 1 ％E 5 - 6 1 ， M C R C C与传统意 义上实性 肾细胞 癌 或其 他 囊 性 肾细 胞癌 相 比较 ，从 临 床 表 现 到 预 后 有 着 诸 多 不 同   J 。 在 WH O( 2 0 0 4 )肾肿瘤分 类 中E 8 1 ， M C R C C 被定 义 为 完全 由囊 腔构成 的肿瘤 ， 囊 腔 问隔 内有小 灶状透 明细胞 ， 与I 级肾透 明细胞癌 无法 区别 。M C R C C具有 低分期 、低 分级和预 后 良好 的 特点 [ 9 - 1 2 ] 。术 前 M C R C C不 易与 肾癌 出血 和坏死 所形成 的假性 囊腔 、 Wi l m 瘤囊 性坏 死 、 囊肿 并发 出血和感 染 、 结节 性硬化 症所致 的 肾损 害 、 多房 囊性 肾瘤 、 肾脓肿 、 获 得 性 肾囊 性 改变 和黄色 肉芽肿性 肾盂 肾炎等鉴别  。

根 据 肾 脏 囊 性 肿 物 的 影 像 学 中 特 点 采 用B o s n i a k  [14 ] 分类 ， 其 中 3 级或 3 级 以上 的肾脏 囊性 肿物 需要病 理来辨别 良恶性 。研究 表 明在 M C R C C中癌 细胞很少 ， 快速 病理很 可能 会导 致误 诊  。 目前国内外对 于其诊 断 和治 疗 的认 识 尚不 充 分 ， 因此 寻找 一个具有 特异 性 的标 志物 来 协 助诊 断 ， 提 高诊 断M C R C C的准确性 ， 具有重 要 的临床意义 。

目 前 已知 C D 2 A P是 相 对 分子 质量 为8 0   0 0 0 的黏 附蛋 白， 它 的基 因位 于人类 的第 6 号 染色体 短臂 ，它可 以和 T细 胞 及 N K细 胞 上 C D 2受体 的 细胞 质结 构域相 互作用 ， 起 到稳 定 T细胞 和 抗原 递 呈 细胞间相互连 接 的作 用 。它参 与 足细胞和 肾小管 上皮细胞 的信号 转 导 通 路 ， 参 与 调 节 足 细 胞 的细 胞 骨 架 ，C D 2 A P的 缺 乏 或 异 常 可 导 致 肾脏 病 变 。2 0 0 4 年T i e n a r i 等  研 究 了 C D 2 A P在人 泌 尿生 殖 系统 和成人 肾脏肿瘤 中的表达 ， 结 果显示 C D 2 A P在 肾透 明细胞 癌 中的表 达较 弱 ， 在乳 头状 肾细 胞癌 和 乳 头状 腺瘤 中的表达 为 阴性 ， 在多 房囊 性 肾细胞 癌 囊 壁 的 内层 上皮表 达较强 。

本研究 发现 C D 2 A P在 多 房囊 性 肾细 胞 癌 和 肾透 明细胞癌 中均 有表 达 ， 在单 纯 性 肾囊 肿 中没有 表达 ， 而在多 房囊性 肾细胞 癌 中靠 近囊 腔 侧 的细胞 质中有 明显 的强染 ， 围绕 囊 壁 内侧 的强染 部 分 呈 明显的线样勾勒 出囊 腔轮 廓 ， 这一 特 征 性 的现 象 有望 为多房囊性肾细胞癌鉴别诊断提供帮助 ， 有较重要的临床意义 。C D 2 A P亦 有 望 成 为 多 房囊 性 肾细 胞 癌诊 断 中的一 个可能 的标志 物 。

肾质是 一种类 似于免疫 球蛋 白样结构 的跨膜 蛋白 ， 由包含 8 个免 疫球 蛋 白样 结 构域 及 1 个纤 维 连接 蛋 白Ⅲ结 构域 的胞 外 部分 、 穿 膜 部分 及 一 小段 胞内部 分组成 。免疫 电镜显 示 ， 肾脏 中 肾质 主要 定位于肾小球裂孔膜¨  ， 具有 足细胞专一性。在 肾脏中 ， C D 2 A P与肾质 的胞 质 部分 接合 ， 将 其 固定 于 细胞 骨架 肌 动蛋 白   。 国 内 已有 研 究 表 明通 过 体 外培养人 肾小球 足细胞 ， 采 用 问接 免 疫荧 光 法 显示 足细胞有 肾质染 色 ， 在 细胞 内 以颗 粒 状 和线 性 沿细 胞骨架分 布 ， 并且 有聚集 中心 团块 状分 布 ， 在细胞 外沿细胞膜分 布 的特 点  ， 这与 我们 通过 免疫组 化 实验发 现 的 C D 2 A P和 肾质 在 多 房囊 性 肾细胞 癌 组织 中所 表达 的部位 和程度非 常相似 。

根 据本实 验所 发现 的 C D 2 A P和 肾质 在 多房 囊性 肾细胞癌 中分布 一致 的特 点 ， 以及 上述 两 种 蛋 白的足 细胞特异 性 ， 是否 说 明 C D 2 A P 和 肾质与多 房囊性 肾细胞癌特 殊 的形 态特征 以及病理 学特点 的形成有关 ? 以及这 种特殊 的形态特 征 以及 病理特 点是否与足 细胞有关 ?多房 囊性 肾细胞癌是 否 为足细胞来源 ? 目前没有 找到相关 证据 。

综上 所述 ， 多 房囊 性 肾细 胞癌 无论 从影 像 学诊断 ， 或 是临床 的术前诊 断 ， 还 是术后 的病理诊 断均存在较 大的 困难 ， 目 前 迫 切需 要 一个 具 有特 异 性 的标志物来 协 助诊 断 。C D 2 A P在 多 房 囊 性 肾细胞 癌 囊壁表 达 的强 度和镜 下 特 点都 具有 特 异性 ， 从 而 有望成 为多房囊性 肾细胞 癌鉴别诊 断 中的一个 可能 的标志物 。此外 C D 2 A P与 肾质 在 多房 囊性 肾细 胞癌 中的相 互关 系以及多房 囊性 肾细胞癌 与足细胞 之间 的关 系 ， 目 前还 不 明确 ， 需要进 一步研 究和探 索 。