妇科千金片对慢性盆腔炎大鼠

血清炎性细胞因子表达的影响

【摘 要】目的：研究妇科千金片对慢性盆腔炎大鼠血清炎性细胞因子表达的影响。方法：采用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及解脲脲原体混合菌接种法建立慢性盆腔炎模型。模型成功后，随机分成妇科千金片低、中、高(0．52，1．04，2．08 g‘kg。)剂量组，中药妇炎康对照组(妇炎康0．41 g·kg“)，假手术组，模型组和空白组7组。治疗21 d后，取外周血及子宫组织，采用ELASA法检测血清白介素1口(IL一1剐、肿瘤坏死因子“(TNF—a)和白介素10(IL一10)表达情况，并取子宫组织观察病理学改变。结果：肉眼观察：与模型组比较，妇科千金片低、中、高剂量组子宫肿胀、充血现象明显减轻，结构较清晰。光镜下观察：妇科千金片低、中、高剂量能抑制大鼠子宫内膜炎症细胞增生，促进其病变上皮细胞增生修复，减轻浆膜充血水肿。与正常组比较，模型组血清IL—lp，TNF．d明显升高(尸<0．01)，血清IL—lo明显降低(P<0．01)。与模型组比较，妇科千金片高、中剂量血清IL一113，TNF—Ot均明显降低(P<0．01，P<0．05)，血清IL一10明显升高(P<0．01)；低剂量血清IL一1p和IL一10分别降低或升高(P<0．05)。结论：妇科千金片可促进受损组织与细胞的形态结构及其生理功能的恢复。其作用机制可能与减少促炎症因子IL一113，TNF—Ot的释放，促进抗炎症因子IL一10表达，调节Thl／Th2平衡有关。

【关键词】   妇科千金片  慢性盆腔炎  炎性因子

妇科千金片作为国家基本药物妇科炎症类唯一人选中成药，因其确切的疗效，广泛用于盆腔炎，尤其是慢性盆腔炎的临床治疗’1’2。。然目前对妇科千金片的研究多局限于临床疗效观察或药效学的验证，对其具体作用机制尚无深入研究。在前期研究中发现，妇科千金片对急性盆腔炎大鼠子宫组织炎症有明显改善作用，作用机制与下调促炎症因子白介素2(IL-2)，白介素6(IL一6)的表达”…，促进免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM)产生，提高机体免疫力有关。据此，本研究拟建立大鼠慢性盆腔炎模型，迸一步探讨其治疗慢性盆腔炎免疫学作用机制。

1材料

1．1动物sD大鼠，雌性，SPF级，体质量(200±20)g，由长沙斯莱克景达实验动物有限公司提供，

1．2药物妇科千金片，由株洲千金药业股份有限公司提供，批号20110901。妇炎康片，由湖南湘泉制药有限公司提供，批号11 l 105。1．3菌株金黄色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus，菌种号44152)，大肠杆菌(Escherichia coli，菌种号26002)，解脲脲原体(M．urealyticum，菌种号52011)，由湖南中医药大学免疫与微生物教研室伍参荣教授惠赠。

1．4仪器与试剂RT-6000酶标仪(深圳雷杜生命

科学股份有限公司)，组织匀浆机(金坛市天竞实验仪器厂)，Motic B5显微成像系统(麦克奥迪实业集团公司)，白介素1卢(IL一1卢，批号2012070849)、肿瘤坏死因子ot(TNF．理，批号2012070621)、白介素10(IL，10，批号2012070835)试剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司提供。

2方法

2．1慢性盆腔炎模型的建立参考文献[7—8]方法，并加以改进，用注射器分别抽取等体积的密度为1×109CFU的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和解脲脲原体菌液，注入无菌培养皿中，混合均匀。将医用明胶片剪成0．5 cm x0．5 cm大小，置于注有混合菌液的培养皿中，与混合菌液充分接触。待明胶充分饱和后，左手持鼠尾，将大鼠倒立，右手夹含混合菌液的明胶经阴道塞至官腔内，左右各1块，并保持鼠倒立1～2 min。隔天1次，连续4次。假手术组塞人不含菌液的明胶片。

2．2分组及给药将成功建立的模型组大鼠按体

质量随机分为7组，每组10只。妇科千金片组低、中、高剂量分别按0．52，1．04，2．08 g·kg“ig给予相应浓度的药液，妇炎康组按0．41 g·kg一给予妇炎康药液，模型组、空白对照组及假手术组分别给予等容积蒸馏水，ig给药，1次／d，连续21 d。

2．3血清中IL．1／3，TNF—a，IL．10含量测定末次给药结束后，禁食不禁水12 h，次13清晨，腹主动脉采血，3 000r·min～，离心10 rain，取血清，采用ELASA法分别检测血清中IL一1／3，TNF．n，IL．10的含量。

2．4大鼠子宫组织病理学观察取血后，解剖大鼠，观察子宫形态是否正常，取大鼠双侧子宫，用4％多聚甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察子宫组织病理学改变。

2．5统计学分析采用SPSS 17．0统计分析软件进行数据处理，各组数据均以面±s表示，首先进行方差齐性检验，若呈正态分布，则采用单因素方差分析，若呈非正态分布，则采用秩和检验。P<0．05为有统计学意义。

3结果

3．1对血清IL—lfl，TNF—Ot，IL-10的影响空白组与假手术组无明显差异，与模型组存在非常显著性差异(P<0．01)，提示造模成功；经治疗后，妇科千金片高、中、低剂量IL-1口，TNF-a与模型组比较含量降低(P<0．01，P<0．05)，IL．10与模型组比较含量

降低(P<0．01，P<0．05)。见表1。

3．2对子宫组织的影响肉眼观察：正常对照组、假手术组大鼠子宫正常，无明显充血及水肿，结构清晰，浆膜无明显充血及水肿，与盆腔周围组织无粘连。模型组大鼠子宫明显肿胀、充血，多数宫腔迂曲扩张，末端球状膨大，切面管壁变薄，管腔内可见清亮液体。给予妇科千金片治疗后，子宫肿胀、充血现

象明显减轻。

光镜显示：模型组子宫内膜上皮细胞可见变性坏死，大量淋巴、浆细胞及少量中性粒细胞浸润，内膜充血水肿。妇科千金片低、中、高剂量组均能抑制大鼠子宫内膜炎症细胞增生，促进其病变上皮细胞增生修复，减轻浆膜充血水肿。

4讨论

当前实验研究多以机械刺激加细菌感染致炎模型为主，在造模过程中涉及打开腹腔操作，实际操作过程中难免出现腹腔感染，为了避免感染，有学者在术后运用抗生素以予预防。抗生素在预防感染过程中，难免将造模细菌一起杀死，从而影响造模效果。

慢性盆腔炎患者以急性盆腔炎治疗不彻底，病程迁延所致多见，主要病理变化是免疫病理损伤。根据其病理病因，结合当前模型的特点，笔者对慢性盆腔炎模型进行了改进，既避免了抗生素对实验的干扰，又因反复施予菌液，使宫腔内保持高细菌环境，对宫腔持续刺激，模拟人类急性盆腔炎治疗不彻底，病程迁延致慢性盆腔炎症状。模型动物病理检验显示：

子宫内膜上皮细胞可见变性坏死，部分伴有内膜上皮脱失现象，大量淋巴、单核细胞浸润，内膜充血、水肿。炎性细胞因子TNF．Ot，IL一1口表达均显著升高，IL一10表达明显降低，提示慢性盆腔炎模型复制成功。

现代医学研究发现部分慢性盆腔炎在慢性发展过程中已经无病原体的存在，慢性阶段的病理改变是继细菌感染后刺激机体所发生的免疫反应所致凹]，与细胞因子、炎症介质等因素的异常改变有关。炎症因子主要分为前炎症因子和抑炎症因子两类，分别由Thl细胞和Th2细胞分泌。IL一1口是前炎症网链中的一级细胞因子¨…，主要由Thl细胞产生。IL一10是体内主要的抗炎细胞因子之一，主要由Th2细胞分泌。Thl／Th2细胞处于动态平衡以维持正常的细胞免疫和体液免疫功能，Thl／Th2细胞平衡异常均可导致疾病的产生"。。据文献报道，慢性盆腔炎模型大鼠血清IL．1口水平显著升高，IL一10水平显著降低¨“。本研究发现模型组大鼠血清IL—lJB水平显著升高(P<0．01)，大鼠血清IL-10水平显著降低(P<0．01)，与文献报道一致，提示机体机体促炎与抑炎反应平衡遭到破坏，前炎症因子分泌和释放亢进，同时抗炎症因子分泌和释放减少，促使炎症反应继续发展，机体组织损伤进一步加重。经妇科千金片治疗后，大鼠血清IL．1口水平显著降低(P<0．05)，大鼠血清IL一10水平显著升高(P<0．05)，提示妇科千金片可能通过提高细胞免疫反应，抑制体液免疫反应，协调Thl／Th2细胞，使机体免疫功能恢复正常。

TNF—a是一种促炎症因子和免疫调节因子，在炎症反应中起核心作用，是启动炎症的重要细胞因子。TNF．d在炎症的初始阶段可有助于机体免疫系统的抗感染作用，但持续升高则导致一些列病理生理改变。模型组大鼠血TNF—O／浓度较空白对照组亦明显增高(P<0．01)，与文献报道一致，说明TNF．Ol在盆腔炎炎症形成和发展过程中发挥重要作用。TNF—O／可以提高中性粒细胞的吞噬作用，增强超氧阴离子的产生．刺激中性粒细胞的释放作用和分泌过氧化酶，还能刺激内皮细胞产生多种黏附分子ICAM一1等，使中性粒细胞、淋巴细胞黏附到内皮细胞上，诱导血管内皮细胞产生炎症介质，引起局部的炎症反应对子宫组织造成炎性病理性损伤。经妇科千金片治疗后血中TNF—Ot显著降低，提示妇科千金片治疗盆腔炎的机制可能是其具有抗免疫及抗炎性细胞因子作用，从而抑制外周血单核细胞和

巨噬细胞分泌TNF—a，使外周血TNF—Ot降低，降低其对单核细胞、淋巴细胞的趋化作用而减轻炎细胞对组织的浸润而实现临床疗效的。

综上所述，妇科千金片能有效抑制慢性盆腔炎大鼠前炎症细胞因子的大量释放，并促进抗炎症细胞因子的释放，这种“此消彼长”的调节作用使前炎症细胞因子和抗炎症细胞因子的平衡关系重新建立，结果是控制了炎症发展，抑制了炎症过程，使得炎症向着消退的方向发展，促进疾病治愈。